Stratageneのクローニングベクター サイト 説明書 ポリリンカーの順(SK)方向、逆(KS)方向 f1開始点の順(+)方向、逆(-)方向 アンピシリン耐性 青/白スクリーニング T3 20-mer、T7 22-m
カテゴリー: molecular biology
BigDye Terminator v.3.1
Quick Reference Guide(プログラム、反応後の精製法。調製は下記) Protocol(29ページの表を10μLで調製) PRODUCT BULLETIN
SYBR Safe DNA Gel Stain
クローニングのためB励起を使いたいときに。 10,000倍ストックを希釈して使用する。ゲルを作るときに加えるか、泳動後50ml TAEで希釈したもので30分間染色。UVまたはB励起。RNAは染まらない。変異原性が低い。ガ
付着末端の迅速ライゲーション
Invitrogen T4 Ligase(1u/μl、 5x buffer付)を使用 インサート:ベクターのモル比を3:1にする 5X Ligase Reaction Buffer 4 μl Vector DNA 3〜3
In-Fusion Dry-Down PCR Cloning Kit
インサート:ベクター = 2 : 1になるように加えるインサートの量(1 kbあたり): 100 ng pDNR-Dual + 41 ng/kb インサート 100 ng pDNR-CMV + 36 ng/kb インサー
SYBR Gold
DNAとRNAを染める。高感度。UVまたは青いトランスイルミネーターで可視化(吸収=300 nmと495 nm、蛍光=537 nm)。泳動後にゲルを染める(ゲルやサンプルに混ぜると泳動が乱れる) ストック 10,000×
6× Loading Buffer
核酸のアガロース電気泳動用 10 mg bromophenol blue、10 mg xylene cyanol FF、10 mg orange G のうち1つ以上 4 g sucrose、1.5 g Ficoll 40
BigDyeを1/8に節約する
1 μl BigDye Terminator Ready Reaction Mix 1.5 μl 5× Sequencing buffer 0.8 pmol primer 50〜120 ng template dsDNA
TaKaRa PrimeSTAR HS
高い正確性と高い増幅率を併せ持つPCR酵素 常温下でのDNA polymerase活性・exonuclease活性を抑える抗体を含む 平滑末端 10 μl 5x PrimeSTAR Buffer 4 μl 2.5 mM
PCRによるインサートのチェック
コロニーのピックアップ PCRチューブにLBを10 μlずつ分注する 20 μlのマイクロピペットに滅菌したチップを取り付け、チップの先端をコロニーに当て、斜め上にすくうようにコロニーを拾う PCRチューブにチップを差し