Invitrogen T4 Ligase（1u/μl、 5x buffer付）を使用
インサート：ベクターのモル比を3：1にする
5X Ligase Reaction Buffer 4 μl
Vector DNA 3〜30 fmol
Insert DNA 9〜90 fmol
（全DNA 0.01〜0.1 μg）
T4 DNA Ligase 1 unit（1 μl）
H20を加えて 20 μl
室温で5分間
100 μlのコンピテントセルに2 μl加える
通常のライゲーション（付着末端、平滑末端）はキットのマニュアル参照
T4 Ligaseを使ったクローニング法の記事
5x Bufferのマニュアル