BigDyeを1/8に節約する

molecular biology
  • 1 μl BigDye Terminator Ready Reaction Mix
  • 1.5 μl 5× Sequencing buffer
  • 0.8 pmol primer
  • 50〜120 ng template dsDNA
  • H2O to 10 μl

5× Sequencing buffer

  • 10 mM MgCl2
  • 400 mM Tris-HCl, pH9.0

精製

  1. 反応が終わったら、1.5 mlチューブに移し、以下を加える
    • 1 μl 3M NaOAc, pH 4.6
    • 25 μl 95% EtOH
  2. 混和し、室温で15分間静置
  3. 2000-3000 × gで30分間遠心
  4. アスピレーターで上澄みを除く
  5. 75 μl 70% EtOHを加え、数回転倒混和
  6. 2000-3000 × gで30分間遠心
  7. アスピレーターで上澄みを除く
  8. 風乾（乾かしすぎないこと）
  9. 10 μlの泳動用バッファーを加えて溶かす